Lorsque nous parlons de « détachement » des cellules, nous ne parlons pas de les déchirer ou quoi que ce soit - au lieu de cela, nous prenons un groupe de cellules qui poussent trop près les unes des autres et les répartissons dans une zone/volume plus grand (comme plusieurs flacons ou plats ou au moins des plus grands). Cela leur permet de continuer à croître et à se multiplier sans manquer d'espace ou de nourriture.
Le détachement est également appelé sous-culture ou, plus communément, passage. Et lorsque nous ajoutons les cellules à un nouveau récipient de culture, nous l'appelons « ensemencement ». Il est facile de faire cela pour les cellules en suspension (que nous pouvons simplement diluer ou, si nous préférons, nous pouvons les centrifuger, retirer le vieux milieu et ajouter un milieu frais d'abord). Pour les cellules adhérentes (cellules qui poussent fixées à la surface d'un récipient de culture tel qu'un plat ou un flacon), nous devons d'abord les séparer physiquement de cette surface (et les unes des autres), généralement en utilisant de la trypsine et de l'EDTA. Plus d'informations à ce sujet plus tard.
Nous déterminons combien ensemencer en « comptant les cellules » (déterminer la concentration des cellules dans un échantillon et utiliser cela pour calculer combien de cellules nous avons) et en calculant pour ensemencer une quantité qui nous donnera une « densité d'ensemencement » particulière (par exemple, 0,1 million de cellules par mL ou 3 millions de cellules par plat de 10 cm) ou en diluant en utilisant des ratios d'ensemencement (par exemple, 1:2 signifierait diluer de moitié en ajoutant 1 partie de solution cellulaire à 1 partie de nouveau milieu).
Les densités et ratios d'ensemencement optimaux dépendront du type de cellule (puisque différents types de cellules ont des temps de doublement et des limites de densité min/max différents) et de vos projets pour elles. Plus vous les détachez, plus il faudra de temps pour qu'elles retrouvent leur densité initiale. Donc, si vous voulez les utiliser bientôt, vous voudrez les détacher haut (par exemple, 1:2) mais si vous n'en avez pas besoin pendant un certain temps, que vous maintenez simplement un stock et que vous ne voulez pas avoir à les passer, vous voudrez les détacher bas (par exemple, 1:10). Consultez les plages recommandées pour le type de cellule avec lequel vous travaillez !
Chaque fois que nous détachons des cellules, nous augmentons le numéro de passage pour ces cellules. Donc, par exemple, si nous commençons avec un stock frais de cellules et que nous le détachons/passe/ sous-culture une fois, nous avons un numéro de passage de 1, que nous écrivons souvent P1. Dans quelques jours (selon la densité d'ensemencement), nous devrons le passer à nouveau. Ce sera le deuxième passage des cellules, donc nous écrirons « P2 » dans nos notes et sur notre flacon/plat. La prochaine fois sera P3, etc.
Il est important de garder une trace du numéro de passage car les cellules acquièrent continuellement des mutations qui pourraient affecter leur croissance et/ou impacter vos résultats expérimentaux. Par conséquent, même si vous traitez avec une lignée cellulaire « continue », « immortelle », qui théoriquement pourrait continuer à croître et à se diviser indéfiniment, vous voulez garder votre numéro de passage bas et revenir à un nouveau flacon de stock si vous atteignez un nombre trop élevé.
C'est particulièrement vrai pour les lignées cellulaires « finies », telles que les lignées cellulaires primaires, qui sont mortelles. Elles ne peuvent pas croître indéfiniment. Au lieu de cela, après un certain nombre de « doubles de population » (PD), où, en moyenne, chaque cellule de la culture a divisé une fois, elles cessent de croître (sénescence). Comme cette limite est liée aux PD (combien de fois les cellules se multiplient) plutôt qu'au passage réel (combien de fois vous divisez les cellules), il peut être plus utile de garder une trace des PD pour de telles lignées cellulaires.
Même si les cellules ne sénescencent pas encore, elles subissent toujours des changements. Souvent, pour les lignées cellulaires primaires, qui ont une identité cellulaire distincte (par exemple, un type spécifique de cellule cardiaque ou cérébrale), elles acquièrent aléatoirement des mutations qui facilitent leur croissance en culture cellulaire mais les rendent moins semblables au tissu d'origine d'où elles proviennent. Comme ces mutations offrent un avantage de croissance, ces cellules sont sélectionnées et prennent le pas sur les cellules plus distinctives. Il est donc important de surveiller les cellules de près avec un œil attentif aux changements morphologiques (forme), etc. et de garder le numéro de passage bas. Malheureusement, pour les lignées cellulaires finies, les premières mutations sont souvent les plus drastiques, car les cellules s'adaptent à croître en dehors de leur habitat habituel. Pour les lignées cellulaires continues, elles ont déjà de nombreuses mutations qui leur permettent de croître facilement, donc les mutations supplémentaires qu'elles acquièrent ont souvent moins d'impact.
Quel que soit le type de cellule, une chose clé à retenir est que les mutations se produisent de manière aléatoire (et seulement alors peuvent-elles être sélectionnées en fonction des avantages de fitness leur permettant de « surpasser » leurs voisines). Différentes populations de cellules provenant de la même source cellulaire originale auront donc différentes combinaisons de mutations. Plus vous êtes proche des cellules originales, moins il y a eu de temps pour diverger, donc en restant à un faible numéro de passage, vous pouvez réduire la variabilité.
Nous avons parlé de trop de passages comme étant « mauvais », mais le passage est crucial pour la survie des cellules.
Comment savons-nous quand détacher les cellules ? Il est préférable de détacher lorsque les cellules sont dans la phase « logarithmique » tardive de croissance.